Trisの基盤77-86-1の生物的緩衝Trometamol

トリスベース 77-86-1 生物バッファ トロメタモール

トリスバッファのタンパク質電解とウェスタン・ブローティングにおける用途

トリスバッファは,タンパク質電解とウェスタンブッティングの不可欠な部分である.ほとんどのSDS-PAGEゲル,実行バッファ,ブッティングバッファは,トリスでバッファ化されている.すべての一般的なバッファは,前混合で利用できます精製したトリス粉末,グリシン,および他の分子生物学のレベルバッファ試料から始めることができます.

ほとんどのSDSゲルは不連続Trisバッファシステムを使用する.大きなペプチドが容易に移動できるように大きな毛孔を持つスタッキングゲルは,通常pH 6.7 〜 6 で作成される.8このpHでは,電離化塩化物イオンは急速に移動し,彼らの後ろのpHを上昇させ,低伝導性のゾーンを持つ電圧グラデーションを作り出します.グリシン (流れるバッファから) が塩化物前線の後に電離化し移動する原因です結合したSDSによる負電荷を有するサンプル内のほとんどのペプチドは,塩化物とグリシンの間に移動し,狭いバンドを形成し,したがって"積み重ね"される.

溶解ゲルに達すると,高pH値 (通常pH値8.7−8.8) に至ると,グリシンが電離化してペプチドを加速し,超越する.溶解ゲルの小孔の大きさはシート効果を発揮します大きさに合わせてペプチドを分離する.

ほとんどの西洋のブローティングプロトコルは,タンパク質の転送のために低離子強度のTrisバッファを使用する.転送時間は,ブローティング装置の種類と関心のあるペプチドサイズ範囲に依存する.

核酸アガロース電泳におけるトリスバッファの使用

トリスバッファは,DNAアガロース電球化に使用されている.主なバッファは,TBE (トリスボラート/EDTA) とTAE (トリスアセテート/EDTA) である.電子解離の過程におけるDNAの解像度と移動性にはいくつかの違いがありますがTBEのボラートイオンは多くの酵素を阻害するので,電泳後DNA浄化を行わないと,酵素媒介による下流操作がうまくいかない場合もありますしたがって,TAEバッファはほとんどのDNAラボで日常使用に好ましいものです.

トリスのバッファを作る

トリスバッファは,25°CでpKaが約8.1であるため,pH値7−9の範囲で有効なバッファであるため,ほとんどの生物学的システムにとって良い選択である.このpH範囲はほとんどの生物学的プロセスに適していますトリス粉は,HEPESのようなより特殊なバッファよりも安価で強固です.

TrisバースとTrisHClの溶液を 2つの方法で作れますそして,正しいpHが得られるまでpHをモニターしながら,一つの溶液 (通常Tris HCl) のアリクォートを他の溶液 (通常Tris ベース) に加える.実践ではめったにない.

一般的に用いられるTrisバッファのほとんどを製造する通常の方法は,Tris基のみから始める.適切な量のTris粉末を水に溶かして,pHをHClで調整し,そして,バッファは,望ましいボリュームまで作られていますpH を調整する際にオーバーシートがないと仮定すると,この方法はイオン強度を変えません.しかし,オーバーシートしてNaOHで再調整した後,または Tris HCl を使って pH を NaOH で調整するTris バッファーの意図された用途に応じて,そのような変化は重要かもしれないし重要でないかもしれません.

Tris バッファーを作るときは,pHを調整する際にTris対応電極を使用することが重要です.単離接点のAg/AgCl電極は,銀が徐々に電極を沉着させ,塞ぐため,Trisバッファと使用すると不安定性を表す.二重結合またはカロメル参照電極の使用により,Trisバッファの正確なpH測定が保証されます.